بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ژن سنتتیک زنجیره HC تتانوتوکسین در سیستم بیانی پروکاریوت

Authors

  • اولاد, غلامرضا مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی -دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله عج
  • رضایی, احسان گروه و مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران
  • سلیمیان, جعفر مرکز تحقیقات آسیب های شیمیایی- دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله عج
  • نظریان, شهرام گروه و مرکز تحقیقات زیست شناسی، دانشگاه جامع امام حسین(ع)، تهران، ایران
Abstract:

زمینه و هدف: توکسین کلستریدیوم تتانی یا تتانواسپاسمین عامل بیماری مهلک کزاز است. امروزه از توکسوئید آن به عنوان واکسن استفاده می شود. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L، HN و HC می باشد. زنجیره HC بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندیدای واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه، طراحی و تهیه ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین، بیان و بهینه سازی آن و تخلیص پروتئین نوترکیب حاصل از آن به عنوان کاندیدای واکسن است. روش بررسی: در این مطالعه آزمایشگاهی پس از انجام مطالعات بیوانفورماتیکی و بهینه سازی ترادف ژن HC، سفارش سنتز ژن در وکتور بیانی pET28a داده شد. تأیید آن به کمک هضم آنزیمی انجام شد. سپس این سازه ژنی در میزبان مناسب (E. Coli Bl21DE3) تراریخت گردید. پس از بیان ژن و تخلیص پروتئین نوترکیب، این پروتئین با کمک وسترن بلات مورد تأیید قرار گرفت. یافته ها: آنالیز بیوانفورماتیکی و مولکولی این ژن، صحت آن را تأیید نمود. باند bp 1356 ژن Hc در ژل آگارز و باند 50 کیلو دالتونی بیان ژن در ژل SDS-PAGE و در غشای نیترو سلولز (وسترن بلات) مشاهده شد. پروتئین نوترکیب در هر دو شکل محلول و نامحلول (اجسام توده ای شکل) تولید شده بود. این دو شکل پروتئین با هر دو روش طبیعی و دناتوره به میزان زیادی تخلیص گردید. نتیجه گیری: با توجه به مزیت های پروتئین نوترکیب HC به توکسوئید کزاز به نظر می آید پروتئین نوترکیب حاصل می تواند به عنوان کاندیدای واکسن جایگزینی مناسبی برای واکسن کزاز باشد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ژن سنتتیک زنجیره hc تتانوتوکسین در سیستم بیانی پروکاریوت

زمینه و هدف: توکسین کلستریدیوم تتانی یا تتانواسپاسمین عامل بیماری مهلک کزاز است. امروزه از توکسوئید آن به عنوان واکسن استفاده می شود. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره l، hn و hc می باشد. زنجیره hc بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندیدای واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه، طراحی و تهیه ژن صناعی زنجیره hc تتانواسپاسمین، بیان و بهینه سازی آن و تخلیص پروتئین نوترکیب حاصل از آن به عنو...

full text

تولید و تخلیص آنتی‎بادی پلی‎کلونال علیه تتانوتوکسین

مقدمه: کزاز نوعی بیماری دستگاه اعصاب است که با افزایش صلابت و گرفتگی‌های عضلات مشخص می‌شود. عامل این بیماری کشنده، توکسین کلستریدیوم تتانی می‌باشد. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L،‌ HN و HC می‌باشد. زنجیره HC بخش اتصال‌دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندید واکسن مطرح می‌باشد. هدف از این مطالعه استفاده از ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین و بررسی ایمنی‌زایی پروتئین نوترکیب حاصل از آن و نهایت...

full text

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن ta...

full text

تولید و تخلیص آنتی‎بادی پلی‎کلونال علیه تتانوتوکسین

مقدمه: کزاز نوعی بیماری دستگاه اعصاب است که با افزایش صلابت و گرفتگی های عضلات مشخص می شود. عامل این بیماری کشنده، توکسین کلستریدیوم تتانی می باشد. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره l، hn و hc می باشد. زنجیره hc بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندید واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه استفاده از ژن صناعی زنجیره hc تتانواسپاسمین و بررسی ایمنی زایی پروتئین نوترکیب حاصل از آن و نهایتاً...

full text

بررسی انواع سیستم‌های بیان پروتئین نوترکیب، معرفی سلول‌هایS2 به‌عنوان یک سیستم بیانی کارآمد

امروزه با استفاده از مهندسی ژنتیک، پروتئین‌های نوترکیبمی‌توانند در حجم انبوه برای پاسخگویی به خواسته‌های فراوان صنعت تولید شوند. پروتئین‌هاینوترکیبمی‌توانند در سیستم‌های بیانی مختلفی بیان شوند و برحسب نوع پروتئین نوترکیب، این سیستم‌های بیانی می‌توانند عاری از سلول، بر پایه سلول پروکاریوتی یا یوکاروتی باشند. برای تولید پروتئین‌های نوترکیبدارویی در اغلب موارد تغییرات پس از ترجمه لازم است و سامانه...

full text

بیان نوترکیب و تخلیص زنجیره سبک نوروتوکسین بوتولینوم تیپa در e. coli از یک ژن مصنوعی

نوروتوکسین های بوتولینوم، سمی ترین ترکیبات بیولوژیک شناخته­­ شده اند که باعث ایجاد فلج عضلانی می­شوند. خاصیت آنزیمی این توکسین ها، مهار آزاد­سازی میانجی عصبی استیل کولین را باعث می­شود. مطالعه حاضر با هدف تولید نوترکیب بخش کاتالیتیک (زنجیره سبک) سم بوتولینوم تیپ a با درصد خلوص بالا، به منظور ارزیابی فعالیت آنزیمی انجام شد.  توالی ژن زنجیره کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ a از پایگاه ژنی ncbi...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 16  issue 1

pages  106- 113

publication date 2014-04

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023